Алеутская болезнь норок - контагиозная, вирусная, медленно протекающая
инфекционная болезнь, характеризующаяся распространенинием плазмолеточной
пролиферацией (плазмоцитозом), гипергаммаглобулинемией, явлениями
геморагического диатеза, анемией и прогрессирующим истощением зверей.
Впервые
болезнь описали Хартзауг и Горем в Северной Америке в 1956 году. Авторы
наблюдали ее с 1946 года у норок алеутской метации вскоре после ее выведения
(Алеутская норка - темно-голубого ок-раса, но бывают и черные). В последнии годы
болезь диагностировали в Англии, Дании, Голландии, Скандинавских странах,
Германии и других странах. Обнаружена и в нашей стране.
1. Возбудитель
Вирусная
природа болезни установлена в 1962 году, но до сих пор вирус недостаточно хорошо
изучен. Размер вириона варьирует от 20 до 25 нм. проходит через фильтры с порами
в 50 нм. Относится к ДНК-содержащим. До настоящего времени не удалось длительно
пассировать вирус на культурах тканей и куриных эмбрионах, поэтому эталонные
штаммы вируса поддерживают только на норках.
Вирус
устойчив к высокой температуре (Т=80ОС - 1 час), химическим
дезинфецирующим веществам.
2. Диагноз
Диагноз
ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков,
патологоанатомической картине и лабораторных исследований.
2.1. Эпизоотологический метод
диагностики В естественных условиях к вирусу алеутской
болезни восприимчивы норки всех окрасок, однако алеутские и сапфировые более
предрасположены к болезни, они заболевают чаще и тяжелее переносят болезнь.
В
организме больных норок вирус находится в сыворотке крови, головном
мозге, мезентериальных лимфатических узлах, почках, селезенке, печени, слюнных
железах и кишечнике. Он связан с клеточными ядрами.
Источником
возбудителя инфекции служат больные звери. В благополучные хозяйства болезнь
заносят с латентно больными норками, выделяющими вирус со слюной, мочей и
фекалиями. Заражение происходит посредством прямого контакта (большую роль играет
половой путь передачи) и непрамого. Возможно заражение алиментарным путем через
пищеварительный тракт; кожу (через поврежденную при покусах кожу и при
проведении массовых прививок и т.п.), а также аэрогенно через дыхательные пути.
Вирус
может переноситься с предметами ухода, одеждой обслуживающего персонала Не
маловажную роль в распротранении данной инфекции играют мухами и кровососущими
насекомыми, в организме которых вирус может не терять своейжизнеспособности в
течении 40 суток.
В условиях
производства алеутская болезнь вначале протекает незаметно с преобладанием
латентных форм болезни и незначительным отходом зверей. С годами, по мере
накопления больных животных, может возникнуть эпизоотия, и тогда отмечают
значительный отход зверей (70-80%), появление животных с клиническими признаками
болезни и патологоанатомическими признаками у павших.
Для
болезни характерна некоторая сезонность, чаще ее отмечают в весенний и осенний
периоды. 2.2. Клинический метод
диагностики Алеутская
болезнь у норок протекает остро, подостро, хронически и латентно. Звери
заболевают в основном в августе. Вторая волна заболеваний отмечается в мае и
июне. Инфекция обычно затягивается на многие годы.
Сначала
регистрируют спорадические случаи среди алеутских и сапфировых норок. у больных
животных угасают воспроизводительные функции. У большинства зверьков первыми
признаками заболевания служат: снижение привеса, исхудание, хотя аппетит может
сохраняться; в фекалиях появляются непереваренные частицы корма.
Далее
отмечают вялость, угнетение, повышение температуры тела. В прогрессирующую
стадию болезни могут возникать кровотечения из ротовой полости. При поносе в
каловых массах появляется кровь, или они становятся дегтеобразными. Могут
развиться явления анемии, менингита (нарушение равновесия, координации движений,
искривление постановки головы и т.п.), парезы и параличи.
Болезнь
заканчивается кахексией и гибелью зверей в коматозном состоянии.
В крови
больных норок находят гиперлейкоцитоз, увеличение содержания лимфоцитов и
уменьшение гранулоцитов. Отмечают значительное повышение содержания
гамма-глобулинов и соответствующее снижение альбуминов. Выявляют повышение
концентрации общего белка в сыворотке крови.
2.3. Патологоанатомический метод
диагностики Патологоанатомические
изменения заключаются в увеличении лимфатических узлов и органов - селезенки,
печени, почек. Лимфатические узлы увеличены, поверхность разреза серо-белого или
серо-коричневого цвета, влажная. Почки увеличены, набухшие, бледно-коричневого
цвета.
Внешний
вид их пестрый, корковый слой усеян множественными серо-белого цвета милиарными
очажками и кровоизлияниями. В хронических случаях почки могут быть сморщенными.
Печень
увеличена, полнокровна. Иногда при диффузном ожирении она приобретает мускатный
рисунок. Селезенка увеличена, с признаками гиперплазии.
На
слизистой оболочке ротовой полости и желудка видны мелкие кровоточащие эрозии, а
в содержимом кишечника - кровь. Слизистые оболочки бледные.
2.4. Ллабораторные методы
исследований Маллен
предложил неспецифический метод диагностики алеутской болезни норок -
йодоагглютинационный тест (реакция йодной агглютинации, йодная проба, йодный
тест, ЙАТ). Он основан на свойстве раствора йода осаждать гамма-глобулины, но
недостаточно чувствителен и с его помощью можно выявить лишь 40-60%-тов
инфицированных норок. У взрослых зверьков полодительная реакция проявляется
через 21-56 дней после заражения, а у молодняка - в 2-3х-месячном возрасте.
Для
приготовления реактива берут 2г кристаллического йода и 4г йодистого калия. В
30-ти мл дистиллированной воды растворяют йодистый калий, добавляют
кристаллический йод. Реактив используют для анализа через 24 часа после
приготовления. Хранят в темном месте в течение 10-ти дней.
Испытуемые
сыворотки должны быть чистыми, без гемолиза. Поэтому кровь берут до кормления, а
пробу ставят в тотже день, неподвергая сыворотки замораживанию. Кроме того
испытуемые сыворотки перед использованием центрифугируют.
На
обезжиренное стекло помещают крупную каплю сыворотки крови и такое же количество
йодистого реактива. Перемешивают при помощи стеклянной палочки. Реакцию
учитывают через 2 минуты. Положительная - характеризуется образованием в капле
крупных темно-коричневых хлопьев (++). Появление нежного осадка расценивается
как слабоположительная (+). При отрицательной реакции сыворотка приобретает
желто-медовый оттенок и остается прозрачной.
В 1969
году Берестов предложил вторую неспецифическую реакцию - тимоловую пробу.
Она основана на том, что при поражении печени изменяются белки в сыворотке крови
и их соотношение. В тимоловом буфере они выпадают в осадок и вызывают помутнение
среды.
Компаненты
реакции: 1) 10%-ный раствор тимола в 95%-ном этиловом спирте; 2) вероналовый
буфер (2,75г веронала + 2,06г мединала + дистиллированная вода до 1 литра). Из
исходных растворов готовят рабочий буфер. В мерную колбу емкостью 100 мл вливают
80 мл вероналового буфера и 1 мл спиртового раствора тимола. Размешивают до
полного растворения и доливают буфер до метки. К 3 мл рабочего буфера добавляют
0,05 мл сыворотки крови. Встряхивают. Результат учитывают через 1-3 часа.
Отрицательный результат - раствор остается прозрачным. Положительный - раствор
мутнеет.
ELISA-метод.
Наиболее перспективный. Используется для выявления антител и позволяет
выявить их через 7 суток после заражения
животных. Иммуноэлектроосмофорез.
Кровь у норок берут до кормления. Заднюю лапку норки фиксируют за крайний палец,
ножницами срезают половину ногтя одного из пальцев и подставляют капиляр к
выступающей капле крови. Когда капиляр заполнится, один его конец закрывают
пластилином. Раневую поверхность обрабатывают 5%-ной настойкой йода. Ножницы
после отбора пробы крови от каждого зверька дезинфицируют 2%-ным раствором
формалина ни 70%-ном спирте или 0,5%-ной настойке йода, или 2%-ном растворе
едкого натра.
Кровь
центрифугируют при 1,5-3,0 тыс об/мин в течение 5-10 минут, затем капиляр
разламывают на границе сыворотки и эритроцитов. В реакции используют сыворотку
крови. Шо
и Ингрем (1973) предложили для прижизненной диагностики использовать реакцию
иммуноэлектроосмофореза с антигеном фреоновых экстрактов печени, селезенки и
лимфатических узлов экспериментально зараженных норок, что позволило выявлять
больных животных уже через неделю после заражения.
В СССР
этот метод разработал гл. ветврач зверосовхоза "Пушкинский", профессор В.С.
Слугин. Набор для серологической диагностики Алеутской болезни состоит из
антигена, изготовляемого Тобольской биофабрикой и Пушкинским зверосовхозом,
контрольной положительной и нормальной сывороток. Компоненты выпускаются в
пенициллиновых флаконах. Антиген в объеме 10 мл содержит 1000 тест-доз.
Позитивная и негативная сыворотки крови по 1 мл и содержат 100 тест-доз. Они
пригодны в течение 6-ти месяцев.
На чистую
обеззараженную пластинку из стекла размером 8 х15 см наливают 30 мл 1%-ного
горячего раствора агара "Дифко" или очищенного бакоагара, приготовленного на
буферном растворе, разведенном пополам дистиллированной водой. Размер пластинок
может быть иным, если используются форетические камеры другого размера. После
застывания агара делают лунки пробойником, соединенным с вакуумным насосом.
Всего делают 204 лунки с таким расчетом, чтобы разместить 10 полных рядов по 20
лунок в каждом и 11-тая для контроля с четырьмя лунками. Диаметр лунок 2,8 мм,
глубина 2,5 мм, объем 7 мкл, расстояние между центрами соседних лунок 6 мм. Края
агаровых пластинок на расстоянии 1 см не должны иметь лунок. Для точного
размещения лунок используют размеченную бумагу или направляющую пластинку из
органического стекла с просверлкнными отверстиями. Буферные растворы должны
иметь рН 8,6-8,9. В 300 мл дистиллированной воды растворяют 10,32г мединала,
затем 1,84г веронала, которые лучше растворять при температуре 50'С. Объем
доводят до 1 литра, измеряют рН.
Сыворотку
крови из капиляра вносят в лунки. В данном случае можно использовать даже
сыворотку с гемолизированными эритроцитами. Антиген пастеровской пипеткой вносят
во все лунки нечетных рядов, а контрольные сыворотки - в нижний ряд лунок.
Пластину помещают а электрофоретическую камеру так, чтобы положительный полюс
был со стороны крайнего вертикального ряда, куда были залиты сыворотки. К краям
пластин прикрепляют фильтровальную бумагу, свернутую в 4-е слоя и опускают ее в
буферный раствор, предварительно смочив ее в этом растворе. Подключают
элетрический ток так, чтобы отрицательный полюс был со стороны антигена. Сила
тока должна быть 0,1 ма/кв.см, напряжением 120-210 В.
Предварительный
учет реакции проводят через 45 минут путем просмотра пластин в проходящем свете
в темном помещении. Должна быть видна четкая линия преципитации в горизонтальных
рядах между антигеном и контрольной положительной сывороткой. При наличии едва
различимой полоски с исследуемыми сыворотками реакция считается сомнительной и
ставится повторно с новой сывороткой. Второй сомнительный результат учитывается
как положительный. Все реакции засчитываются, если в контроле с позитивной
сывороткой были линии преципитации, а с негативной (контрольной) сывороткой -
отсутствовали. При подозрении антиген титруют с неразведенной сывороткой до 1:4,
а сыворотку с неразведенным антигеном до 1:16. По результатам исследований
составляют акт.
3. Иммунитет и специфическая профилактика
Все
заболевшие норки гибнут, поэтому вопрос о естественном иммунитете отпадает. В
1964 г. была разработана инактивированная формолвакцина. Ее вводят п\к, в\м или
в\к по 1-2 мл. Вакцина создает непрочный иммунитет, но позволяет повысить
резистентность животных и прервать распространение
инфекции. Борьба
с Алеутской болезнью включает раннее выявление серопозитивных животных, которых
изолируют и убивают после созревания волосяного покрова. Особое внимание уделяют
очистке и дезинфекции после убоя серопозитивных животных.
В
неблагополучных по Алеутской болезни хозяйствах зверей исследуют три раза в год:
осенью - все племенное поголовье перед комплектованием стада; в январе-феврале -
все поголовье перед гоном; в июне-июле - самок, оставшихся без приплода и самцов
с низкой активностью или тех, которые покрыли самок, но у них регистрировали
пропустование, появление мертворожденных щенков, гибель молодняка. Кроме того,
исследуют норок с клиническими признаками Алеутской болезни.
В
благополучных хозяйствах исследуют только ввозимых зверей дважды в период
карантина. Если получен положительный результат, то зверей из этой партии
исследуют как в неблагополучном хозяйстве.
ЛИТЕРАТУРА: 1.
Ветеринарное законодательство / Т. 4. С. 436-439.
